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-./鏈的延伸終止在 %%.23處。 !!水浴氮吹儀雙脫氧合成末端終止法 -./序列分析操作中要用四個(gè)反應(yīng)管，每一管都加入 -./模板， -./聚合 酶，四種 %.23，其中一種 %.23是用同位素標(biāo)記的。除此之外，每一管還要加入一種 %%.23，即 /管加入 %%/23，2管加入 %%223，4管加入 %%423，5管加入 %%523。以 /管為例，當(dāng)模板上堿基是 2時(shí)，反應(yīng)體系 中有兩種堿基可與之配對(duì)： %/23和 %%/23。如果是 %/23與之配對(duì)，引物的延伸還能繼續(xù)下去。如果是 %%/23與之配對(duì)，引物的延伸就會(huì)到此終止。 /管中會(huì)出現(xiàn) 長(zhǎng)短不一，但總是終止在 /位的核苷酸鏈。另外三管中出現(xiàn) 的情形也如此，即四個(gè)反應(yīng)管分別存在以四種不同核苷酸為 01末端的長(zhǎng)度不等的核苷酸鏈。這四個(gè)反應(yīng)管中核苷酸鏈的 總的結(jié)果是一系列長(zhǎng)度只差一個(gè)核苷酸的 -./聚合鏈。聚 合反應(yīng)結(jié)束后，把 ;管內(nèi)的產(chǎn)物分別加到超薄的聚丙烯酰 胺—尿素變性凝膠板上電泳，這種電泳分辨能力可達(dá)到相差 一個(gè)核苷酸的水平，四條泳道形成不同的電泳條帶。經(jīng)過(guò)放 射自顯影，從下向上讀即是新合成鏈 71!01的堿基排列順序 （圖 89 <）。>*? 4&@A$#B法，該法是先用同位素 對(duì) -./片段的末端進(jìn)行標(biāo)記，然后用專一的化學(xué)試劑對(duì)特 定的堿基進(jìn)行化學(xué)修飾，經(jīng)過(guò)修飾的堿基從糖環(huán)上脫落，同 時(shí)和該糖環(huán)相連的磷酸二酯鍵斷

裂，產(chǎn)生在該修飾堿基處斷 開(kāi)的長(zhǎng)短不一的 -./片段。硫酸二甲酯專一修飾鳥(niǎo)嘌呤，甲酸修飾嘌呤堿基，肼修飾嘧啶堿基，在有 .*5@存在的條件下，肼只修飾胞嘧啶。分別用上述化學(xué)試劑降解 -./，然后電泳。電泳條帶從下向上讀 即是待測(cè) -./ 71!01的核苷酸序列（圖 89 8:）。 第五節(jié) !轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、克隆動(dòng)物和基因剔除技術(shù) 一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 !!轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（B#*+C,$+&’ *+&?*@C）是利用基因工程和胚胎工程技術(shù)，改變動(dòng)物遺傳性狀的新方法，是將 外源基因?qū)雱?dòng)物的受精卵，再將受精卵植入到代孕動(dòng)物的輸卵管或子宮中培育的動(dòng)物（圖 89 88）。轉(zhuǎn) 基因動(dòng)物中的外源基因已與動(dòng)物本身的基因組整合，外源基因隨細(xì)胞分裂而增殖，在體內(nèi)得到表達(dá)，并傳 圖 89 8:!化學(xué)修飾裂解法測(cè)序原理  第十七章 #基因技術(shù)#"! 給下一代。也有人先將外源基因?qū)刖踊蚵鸭?xì)胞，再讓導(dǎo)入外源基因的精子或卵細(xì)胞受精，培育轉(zhuǎn)基因 動(dòng)物。 ##轉(zhuǎn)基因動(dòng)物能夠創(chuàng)造醫(yī)學(xué)研究需要的動(dòng)物模型、改 良動(dòng)物品質(zhì)、培育動(dòng)物新品種。例如，將大鼠的生長(zhǎng)激 素基因?qū)胄∈笫芫雅嘤霓D(zhuǎn)基因小鼠體重是普通 小鼠的二倍，成為超級(jí)鼠。 ##人體內(nèi)有許多種活性肽和生長(zhǎng)因子，它們?cè)隗w內(nèi)的 生理功能十分重要，但含量極少，提取和純化都很困難。 可利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將人類的這些基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物的受精 卵，培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的某些產(chǎn)物中提取 這些基因的產(chǎn)物。如將人類的基因轉(zhuǎn)入奶牛，從牛奶里 提取人類基因的產(chǎn)物�；�?qū)⑷祟惢蜣D(zhuǎn)入雞，從雞蛋內(nèi) 提取基因產(chǎn)物。這些轉(zhuǎn)

基因動(dòng)物就像工廠一樣可以源 源不斷的提供人類需要的產(chǎn)品，因此稱其為動(dòng)物工廠或 生物工廠。 ##外源基因能夠轉(zhuǎn)入動(dòng)物，建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，也可以 轉(zhuǎn)入植物，建立轉(zhuǎn)基因植物。以這些轉(zhuǎn)基因生物為直接 食品或作為原料加工生產(chǎn)的食品為轉(zhuǎn)基因食品。轉(zhuǎn)基 因食品的出現(xiàn)有望幫助解決人們吃飯的難題。但對(duì)轉(zhuǎn) 基因食品的安全性還沒(méi)有取得共識(shí)，對(duì)目前應(yīng)不應(yīng)該把 轉(zhuǎn)基因食品投放市場(chǎng)還存在著爭(zhēng)論。 二、克隆動(dòng)物 ##克隆是英語(yǔ) $%&’(的音譯，即無(wú)性繁殖�？寺�(dòng)物 是生物體通過(guò)體細(xì)胞進(jìn)行的無(wú)性繁殖以及由無(wú)性繁殖 形成的基因型完全相同的后代個(gè)體組成的種群�？寺� 動(dòng)物是多種生物技術(shù)結(jié)合的產(chǎn)物，是把細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到去 核的卵細(xì)胞中，培育新型生物品種的細(xì)胞工程技術(shù)�？� 隆動(dòng)物技術(shù)主要包括三個(gè)步驟。 # #!*制備成熟的卵細(xì)胞。 # #)*細(xì)胞核移植，將供體細(xì)胞的細(xì)胞核與去核的 卵細(xì)胞融合成一個(gè)雜合細(xì)胞。 # #+*將“核質(zhì)融合”的卵細(xì)胞移植到借腹懷孕動(dòng) 物的子宮發(fā)育直到出生（圖 !" !)）。 ##克隆動(dòng)物的遺傳信息完全來(lái)自于提供細(xì)胞核的 動(dòng)物，即克隆動(dòng)物是供核動(dòng)物的復(fù)制品。由此可見(jiàn)， 克隆動(dòng)物與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物不同。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是將外源 基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物的受精卵內(nèi)，產(chǎn)生后代個(gè)體的方式仍 然是有性繁殖，只不過(guò)后代細(xì)胞染色體內(nèi)插入了外 源基因�？寺�(dòng)物是將供體細(xì)胞核移入到去除了細(xì) !*提取卵細(xì)胞； )*提取體細(xì)胞； +*卵細(xì)胞去核； ,*體細(xì)胞核轉(zhuǎn)胞核的未受精卵細(xì)胞內(nèi)，是細(xì)胞無(wú)性繁殖的產(chǎn)物。 入去核卵細(xì)胞； -*篩選；